Isolasi fraksi aktif sitotoksik ekstrak kulit batang kamboja putih (Plumeria alba) telah dilakukan. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengisolasi senyawa metabolit sekunder dari ekstrak kulit batang P. alba yang memiliki sifat aktif sebagai sitotoksik. Hasil pengujian aktivitas sitotoksik dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) menunjukkan bahwa nilai LC50 untuk ekstrak n-heksana sebesar 2,28 ppm, etil asetat 156,08 ppm dan metanol 84,31 ppm. Berdasarkan nilai LC50 menunjukkan bahwa ekstrak n-heksana lebih aktif dibandingkan dengan etil asetat dan metanol. Kemudian ekstrak n-heksana diisolasi lebih lanjut dengan metode Kromatografi Kolom Cair Vakum (KKCV). Hasil KKCV didapatkan 5 fraksi gabungan yang selanjutnya disebut dengan fraksi A-E. Hasil uji aktivitas sitotoksik dari fraksi A-E menunjukkan bahwa fraksi yang paling aktif adalah fraksi C. Berdasarkan hasil analisis Kromatografi Gas-Spektrometri Massa (KG-SM) dari fraksi gabungan dapat dilihat fraksi B yang mengandung senyawa metabolit sekunder golongan terpenoid yaitu: lupeol (C30H50O) yang diduga menyumbang keaktifan sitotoksik terhadap larva Artemia salina. Kata kunci: Plumeria alba, Brine Shrimp Lethality Test (BSLT), Artemia salina dan Sitotoksik