Penelitian ini bertujuan untuk untuk mengetahui kualitas semen beku Sapi Aceh melalui pengamatan secara mikroskopik di laboratorium Ilmu Pemuliaan dan Reproduksi Ternak Program Studi Peternakan Fakultas Pertanian Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh. Materi yang digunakan dalam penelitian ini berjumlah 12 unitstraw semen beku Sapi potong.Dengan materi utama9 unit straw semen beku Sapi Aceh yang berasal dari 3 pejantan sapi Aceh yang berbeda(Nanggroe, Agam dan Rencong). Sebagai pembanding, pengamatan juga dilakukan pada semen beku Sapi Ongole (Orlon) sebanyak 3 unit straw.Semen beku diperoleh dari Dinas Kesehatan Hewan dan Perternakan Provinsi Aceh yang diproduksi oleh Balai Inseminasi Buatan Lembang, Jawa Barat. Penelitian ini dilaksanakan pada tanggal 06 Agustus 2016sampai dengan08 Agustus 2016.Parameter yang diamati adalah konsentrasi sperma, motilitas massa, motilitas individu, abnormalitas spermatozoa dan viabilitas.Data yang diperoleh selama penelitian kemudian ditabulasi dan ditentukan rataan, standar deviasi dan standar error menggunakan Software Microsoft Excel.Hasil yang diperoleh dari penelitian adalah pejantan sapi Aceh “Nanggroe” memiliki kualitas semen beku yang lebih baik dibandingkan semen beku milik pejantan sapi Aceh lainnya dengan nilai rataan konsentrasi (833,33 juta/ml), motilitas massa (++), motilitas individu (45,83%), abnormalitas (10,33%) dan viabilitas (54,17%). Kata kunci: Sapi Aceh, Spermatozoa, Evaluasi semen, Kualitas semen, Semen beku.